技术文章 / article 您的位置:网站首页 > 技术文章 > 抗体常见问题-卡米洛

抗体常见问题-卡米洛

发布时间: 2022-02-24  点击次数: 199次

                                                抗体常见问题-卡米洛

解决方案



边缘效应

 

组织边缘贴附不牢,边缘组织松脱漂浮于液体中

APES/多聚赖氨酸处理玻片;组织切片尽量薄;尽量避免选用坏死较多的组织

试剂未充分覆盖组织

滴加试剂时让试剂完全覆盖组织

非特异性染色体

 

 

 

 

 

 

 

 

 

抗体质量问题

使用质量有保证的抗体

抗体孵育时间长

减少孵育时间

抗体浓度过高

降低抗体浓度

一抗为多抗

使用单克隆抗体

内源性过氧化物酶及生物素

延长灭活时间

封闭不足

延长封闭时间

DAB孵育时间过久或浓度过高

按说明书配置试剂,镜下控制反应时间

抗体孵育后洗涤不充分

每次孵育之后洗3*5

滴加试剂时干片

及时滴加试剂

切片在缓冲液中浸泡过久

抗原修复之后及时封闭加一抗,不能过夜

阴性结果

 

 

 

 

 

 

抗体浓度及质量

选择有质量保证的抗体,先做预实验摸索抗体使用浓度

抗原修复不全

摸索合适的抗原修复方式及修复时间

抗原丰度

正常阴性

封闭时间过长

减少封闭时间

DAB孵育时间短

镜下控制显色时间

细胞通透不全,抗体未能进入细胞反应

选择合适的通透剂及其反应时间

一抗二抗不匹配

选择正确来源的二抗

脱片

 

 

 

 

 

玻片未处理好

玻片清洗干净后用APES或多聚赖氨酸处理

切片厚薄不均匀

更换刀片;调整好切片机状态

烤片时间或温度不够

60摄食度2小时

组织自身问题

肿瘤坏死组织及骨组织本身易脱片

抗原修复时温度迅速变化

抗原修复后让其自然冷却

操作时用力过猛

有脱片嫌疑的切片不要用力甩,用吸水纸吸干残余液体

染色弱

 

 

 

抗体浓度低,孵育时间短

提高抗体浓度,延长反应时间

试剂使用超过有效期

试剂定时更新

滴加试剂时残余缓冲液过多使试剂稀释

滴加试剂前尽量减少残余液体

封闭过度

减少封闭时间

着色不均匀

 

 

 

切片厚度不一致

更换刀片;调整好切片机状态

试剂配制未混匀使局部浓度不一致

试剂充分混匀后滴加

试剂未完全覆盖组织

滴加试剂时让试剂完全覆盖组织

脱蜡不完全

更换脱蜡剂或延长脱蜡时间






联系我们

contact us

扫一扫,关注我们

返回顶部