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人髓鞘相关生长抑制因子B(Nogo-B)试剂盒

人髓鞘相关生长抑制因子B(Nogo-B)试剂盒

简要描述:人髓鞘相关生长抑制因子B(Nogo-B)试剂盒
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗人髓系细胞触发受体
-1 (TREM-1)抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入人髓系细胞触发受体-1 (TREM-1)
校准品和待测样本,再加入另一株 HRP 标记的抗人髓系细胞触发受体-1 (TREM-1)抗体(酶
标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,

产品型号:

厂商性质:生产厂家

更新时间:2021-08-06

访问量:34

详情介绍
品牌自营品牌CAS-------------
分子式-------------------纯度------
分子量------货号SPR642
规格48t/96T供货周期现货
主要用途科学试剂盒应用领域医疗卫生,环保,食品,生物产业,农业

人髓鞘相关生长抑制因子B(Nogo-B)试剂盒

实验原理
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗人髓系细胞触发受体
-1 (TREM-1)抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入人髓系细胞触发受体-1 (TREM-1)
校准品和待测样本,再加入另一株 HRP 标记的抗人髓系细胞触发受体-1 (TREM-1)抗体(酶
标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-
酶标抗体的夹心复合物。加底物 A 和 B,底物在 HRP 催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫
酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪 450nm 波长上测定吸光度(OD 值),吸光度(OD 值)
与待测样品中人髓系细胞触发受体-1 (TREM-1)的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算
出样本中人髓系细胞触发受体-1 (TREM-1)的浓度。
试剂盒限制性
1、仅供科研使用,不得用于临床诊断。
2、在试剂盒标示的有效期内使用,过期产品不得使用。
3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。
4、使用试剂盒配套的样品稀释液。
5、如果样本值高于最高标准品浓度值,请将样本适当稀释后,再重新测定。
6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果,检测前,请排出该因素。
7、通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。
技术提示
1、混合蛋白溶液时,避免起泡。
2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,
避免交叉污染。
3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。
4、使用自动洗板机时,加入一个 30 秒浸泡的步骤,可以提高检测精度。
5、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。
6、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄
色。
7、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
8、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温
育操作

人髓鞘相关生长抑制因子B(Nogo-B)试剂盒


试剂盒组分与保存
未开封的试剂盒保存在 2-8 度,不得使用过期试剂盒。
组分
数量
主要成分
开封后储存
校准品
0.3ml/管
--
2-8℃14 天
包被微孔板
96T/48T
预包被固相抗体
2-8℃14 天
HRP 标记抗体
10mL
HRP 标记的检测抗体
2-8℃14 天
样本稀释液
6mL
--
2-8℃180 天
底物液 A
6mL
0.01%过氧化氢
2-8℃180 天
底物液 B
6mL
0.1%TMB
2-8℃180 天
终止液
6mL
2mol/L 稀硫酸
2-8℃180 天
20×浓缩洗涤液
25mL
0.05%Tween20
2-8℃180 天
说明书
1 份
--
--
自封袋
1 个
--
--
不干胶
2 片
--
--
校准品浓度依次为:240、 120、 60、 30、 15、 7.5 pg/mL。
其他用品
1、酶标仪(450nm)
2、精密移液器及一次性吸头
3、蒸馏水
4、洗瓶或者自动洗板机
5、37℃水浴锅或恒温箱
6、500ml 量筒
生物安全
1、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃
物都应按照传染物进行处置。
2、试剂盒的液体组分中,含有 proclin-300 防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟雾
与皮肤接触。
3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾。
4、戴上防护手套,实验完成后彻底洗手。仅供科研使用,不得用于临床诊断。
4
样品的采集和储存
以下只是列出样品采集和保存的一般指南。所有样本采集保存过程中,不得使用叠氮钠
做为防腐剂。
1、细胞培养上清:4000rpm 条件下离心 20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃
以下,避免反复冻融。
2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm 条件下离
心 20min,小心地分离出血清,保存在-20℃以下,避免反复冻融。
3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在 4000rpm 条件下,离心 20 分钟取上清,
血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。
样本收集后,无法一次检测完毕,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温
下解冻,确保样品均匀充分解冻。
4、组织匀浆用预冷的 PBS (0.01 M,pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液,称重后将组织剪碎。
将剪碎的组织与对应体积的 PBS(一般按 1: 9 的重量体积比,比如 1g 的组织样品对应 9 mL
的 PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在 PBS 中加入蛋白酶抑制
剂)加入玻璃匀浆器中,在冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行
超声破碎或反复冻融。最后将匀浆液 5000×g 离心 5-10 分钟,取上清检测。
5、细胞提取液:贴壁细胞用冷的 PBS 轻轻清洗,然后用胰蛋白酶消化,1000×g 离心 5 分钟
后收集细胞;悬浮细 胞可直接离心收集。收集的细胞用冷的 PBS 洗涤 3 次。每 1×106 个
细胞中加入 150-200μLPBS 重悬并通过反复冻融使细胞破碎(若含量很低可减少 PBS 的体
积)。将提取液于 1500×g 离心 10 分钟,取上清检测。
6、其他生物体液:1000×g 离心 20 分钟,除去杂质及细胞碎片。取上清检测。

试剂准备
1、使用前,所有的组分都要至少复温 60min,确保充分复温到室温。
2、浓缩洗涤液:从冰箱取出的浓缩洗涤液,会有结晶产生,这属于正常现象,水浴加热使结
晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水,按 1:20 稀释,即 1 份的浓缩洗涤液,添加 19 份的蒸
馏水。
3、底物:底物液 A 和 B,在使用前,按 1:1 体积充分混合,混合后 15 分钟内使用。
仅供科研使用,不得用于临床诊断。
5
操作程序
所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。
1、按前面说明书描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。
2、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。
设置标准品孔、0 值孔、空白孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL,0 值
孔加样本稀释液 50μL,空白孔不加,样本孔加待测样本 50μL。
3、除空白孔外,标准品孔、0 值孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体
100μL。
4、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置 20S,甩去洗涤液,吸水
纸上拍干,如此重复 5 次。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡
30s 的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分
拍干反应板。
6、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合,所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜盖住反
应板,37℃水浴锅或恒温箱温育 15min。
7、所有孔加入终止液 50μL,在酶标仪上读取各孔吸光度(OD 值)。






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