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简述生长因子elisa试剂盒的操作流程

发布时间: 2021-03-05  点击次数: 114次
   简述生长因子elisa试剂盒的操作流程
  生长因子elisa试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人血小板衍生生长因子(PDGF)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的人血小板衍生生长因子(PDGF)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  生长因子elisa试剂盒操作流程如下:
  (1)待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。
  (2)酶标板置4℃,包被过夜。
  (3)洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍(将洗涤液注满板孔后,即甩去),之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
  (4)阴性对照孔每孔加入pbs50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
  (5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  (6)洗板,同(4)。
  (7)每孔加1:5000稀释的hrp-标记的抗兔抗体工作液100μl。
  (8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
  (9)洗板,同(4)。
  (10)每孔加tmb显色液100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。
  (11)每孔加100μl2mol/lh2so4终止反应。
  (12)分别测450nm吸光值w1和630nm吸光值w2,终测得的od值为两者之差(w1-w2),以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
  (13)数据处理:在得出标本(s)和阴性对照(n)的od值后,计算s/n值。s/n***2.1为阳性判定标准。
  结果判断:
  绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。
  生长因子elisa试剂盒实验说明:
  1、试剂盒保存:-20(较长时间不用时);2-8(频繁使用时)。
  2、浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
  3、中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
  4、刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。

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