新生牛血清(NewbornCalfSerum,简称NBCS)是通过采集出生0-7天或0-30天内的新生牛静脉血,经除菌过滤后制成的用于动物细胞实验的生物试剂。其质量好坏直接影响细胞的生长情况,因此判断牛血清的性能至关重要。
总蛋白含量
定义:总蛋白是牛血清中的重要成分,在细胞培养中起着维持渗透压、pH值缓冲、物质运输和提供营养等作用。
检测方法:通过化学成分分析,测定血清中的总蛋白含量。一般来说,国产牛血清的总蛋白含量在3.7%到4.4%之间。
评估标准:总蛋白含量适中且稳定,表明血清质量好。如果总蛋白含量过高或过低,可能意味着血清掺假或处理不当。
血红蛋白含量
定义:血红蛋白是评价牛血清生产工艺好坏的重要指标。在采血、运输和储存过程中,红细胞可能会裂解释放出血红蛋白。
检测方法:通常采用分光光度法来测定血红蛋白含量。
评估标准:优质的新生牛血清中血红蛋白含量应尽可能低。《中国药典》三部(2015版)要求血红蛋白含量不高于200mg/L。血红蛋白含量高可能导致细胞受损和下游纯化难度增加。
内毒素含量
定义:内毒素是由革兰氏阴性菌细胞壁裂解释放的毒素,不利于细胞生长。
检测方法:通过定量检测内毒素含量,通常以EU/ml为单位。
评估标准:内毒素含量≤10EU/ml为特级,内毒素含量>10EU/ml且≤25EU/ml为优级,内毒素含量≥25EU/ml为标准级。内毒素含量越低,对细胞生长越有利。
外观
颜色:根据血红蛋白含量的不同,胎牛血清可表现出黄色或红色。优质进口血清呈现淡黄或微红色,而劣质血清可能呈现橘红色或鲜红色。热灭活或保存不当的血清会呈现暗红甚至咖啡色。
澄清度:进口血清由于蛋白和脂类含量低,表现为稀薄、清淡;国产血清相对粘稠,颜色略深。
沉淀
观察:进口血清在过滤分装前很少反复冻融,成品清澈。但随着时间推移,血清中的纤维蛋白会析出形成沉淀。
评估:优质血清在生产后初期应清澈无沉淀,长时间存放后可能会有少量沉淀。
免疫球蛋白含量
定义:免疫球蛋白的含量可以反映采血时牛龄情况。胎牛血清不含IgM,IgG含量也较低。
检测方法:通过免疫学方法测定IgG和IgM的含量。
评估标准:IgG含量远低于标准值,表明采血时牛龄较小,血清质量较好。
微生物和病毒含量
定义:微生物包括细菌、霉菌、支原体、噬菌体及各类病原性病毒,这些微生物会影响血清质量。
检测方法:通过细胞培养实验和多种病毒检测来评估。
评估标准:出厂前经过严格检测,确保无致病变、无血吸附、多种病毒检测阴性。
批间差
定义:不同批次血清中的微妙成分差异可能导致细胞适应期延长,影响实验结果。
评估标准:通过严格的质量控制筛选和验证标准,减少批间差异。