微载体免疫技术

微载体免疫技术

为进一步提高血清学反应的敏感性，加速对被检标本结果的报告时间，可应用免疫微载体作为诊断液进行检测。这种诊断液系将已知抗体吸附在红细胞、炭粉或乳胶等微载体上，制成所谓的固相抗体，它是一种仍保持抗体特性的固态诊断血清，用它进行间接凝集反应时，不但可与相应抗原发生特异结合，同时也可使吸附抗体的微量载体聚集在一起，这样可使肉眼难以观察到的微量抗原抗体结合物，尤其是微量的可溶性抗原-抗体结合物，形成肉眼可见的反应产物，因而明显地提高了血清学反应的敏感性，反应中的微载体起着“放大器"作用。

(一) 间接红细胞凝集试验 即将已知的抗体球蛋白挂在经醛化鞣酸化处理的红细胞上，制成所谓的致敏红细胞诊断液，用以实施反向间接血凝试验，即在反应板孔内，如诊断液与被检的相应抗原相遇时，红细胞即被凝集，形成锯齿状凝块沉于孔底，即为阳性反应，否则红细胞自然下沉，于孔底形成圆点状沉淀物为阴性反应。另外，亦可用已知抗原致敏红细胞制成诊断液检测相应抗体，此即正向间接血凝试验。

间接血凝试验是一项准确而敏感的血清反应，在敏感性方面表现得尤为突出，如可检出每ml含100万个鼠疫杆菌、野兔热杆菌或类鼻疽杆菌，每ml含160万个炭疽芽胞、2 500万个布鲁氏菌、5000万个霍乱弧菌、0.04μg肉毒梭菌毒素等。不足的方面是由于红细胞表面是一个复杂的有机结构，上面往往有许多抗原，可以和血清中的其他成分起反应，因而一定程度地影响试验的特异性。

(二) 间接炭凝集试验 即将已知的抗体球蛋白在一定温度和pH值下吸附在细炭粉表面上，制成所谓的致敏炭粉诊断液，当与相应抗原在实施反应的玻板上相遇时，炭粉则被凝集，此时倾斜玻璃板观察时，则看到好似无数个黑色带闪光的细砂粒在液滴中滚动，即为阳性反应；如果液滴仍呈浓墨汁状团集一起，则为阴性反应。

炭凝集反应的最大特点是，对标本的纯度要求不甚严格，受杂质的干扰较小。不足的方面是敏感性稍差，只能检出每毫升含2500万个鼠疫杆菌、类鼻疽杆菌或马流产沙门氏菌，和1亿个布鲁氏菌和霍乱弧菌的标本等。

(三) 间接乳胶凝集试验 是利用直径为0.6～0.7μm的聚苯乙烯乳胶(polystyrene)作载体，吸附抗体，制成致敏乳胶诊断液，检测含相应抗原标本的一种间接凝集反应。它的原理和操作方法与上述的间接凝集试验类似，只是采用人工合成的乳胶微球作载体，而不是天然的红细胞或炭粉。在玻璃板上实施反应，当致敏乳胶与相应抗原相遇，如乳胶颗粒被凝集，则好似粉笔末飘浮在水中，为阳性反应；液滴仍呈乳状均等混浊，则为阴性反应。

乳胶凝集反应的优点在于快速，数分钟即可初报结果；操作简便，无需特殊的仪器设备，在基层单位即可进行。所以近几年来，国内外已逐渐用其对沙门氏菌、炭疽杆菌、流行性感冒杆菌、嗜肺军团杆菌、脑膜炎双球菌、肺炎球菌、葡萄球菌肠毒素(2×10^-4μg/ml)和嗜盐杆菌等作鉴定，以及对钩端螺旋体患者血清抗体作检测。不足的方面是，聚苯乙烯乳胶的性质较脆弱，易受反应环境中存在的杂质的干扰，发生非特异性自家凝集，出现假阳性反应。